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上海錦玟:二氧化碳培養(yǎng)箱在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2019-06-30      點(diǎn)擊次數(shù):2327

    二氧化碳培養(yǎng)箱

    動(dòng)物細(xì)胞多數(shù)需要微堿性環(huán)境,pH約為7.2~7.4,以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統(tǒng)對(duì)于維持培養(yǎng)基的pH是至關(guān)重要的,動(dòng)物培養(yǎng)基的pH是通過(guò)模擬血漿中天然存在的

    CO2/NaHCO3(實(shí)際是CO32-/HCO3-)系統(tǒng)來(lái)控制的。配置動(dòng)物培養(yǎng)基時(shí),會(huì)將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養(yǎng)基。

     一方面,由于NaHCO3不穩(wěn)定,易分解產(chǎn)CO2,CO2從培養(yǎng)液中游離到空氣中,會(huì)使培養(yǎng)液pH升高;另一方面,細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的CO2以及代謝產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物,又使pH降低。

       在培養(yǎng)開(kāi)始的一段時(shí)間,細(xì)胞較少,呼吸產(chǎn)生的CO2較少,前者作用大于后者,培養(yǎng)液中pH可能會(huì)明顯上升,這就需要培養(yǎng)箱中補(bǔ)充一定量的CO2來(lái)維持pH;而后期隨著細(xì)胞數(shù)目增多,細(xì)胞產(chǎn)生CO2增加,后者作用便大于前者,此時(shí),培養(yǎng)基中pH可能會(huì)明顯降低,盡管大多動(dòng)物細(xì)胞耐酸能力比耐堿能力略強(qiáng)一些,但如果超過(guò)警戒值,則需要更換培養(yǎng)基進(jìn)行傳代。

     培養(yǎng)液中一般加入酚紅作為pH指示劑,所以此培養(yǎng)基中顏色變化是:櫻桃紅色→粉紅色→黃色。如果使用培養(yǎng)基之前,先通入CO2,或在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行開(kāi)放式培養(yǎng),則培養(yǎng)基顏色變化是:櫻桃紅色→黃色。如果培養(yǎng)基變黃,則需要及時(shí)更換培養(yǎng)基。

    培養(yǎng)箱中CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡,如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設(shè)定在5%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量應(yīng)為1.97 g/L;如果CO2濃度維持在10%,則NaHCO3的加入量應(yīng)為3.95 g/L。

     動(dòng)物細(xì)胞對(duì)pH變化比較敏感,但植物細(xì)胞就沒(méi)那么嬌弱了,培養(yǎng)過(guò)程中pH的變化幅度只要?jiǎng)e太大,對(duì)它并不會(huì)造成明顯損傷。

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